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Verletzung umbilical Blutfluß


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Click here for the english version. For other languages click here. Sie bilden einen wesentlichen Teil des angeborenen Immunsystems ein. Während der akuten Entzündung, Neutrophile sind die ersten Entzündungszellen an der Stelle der Verletzung zu migrieren.

Eine Vielzahl von in vivo und in vitro-Methoden entwickelt hat, das Studium dieser Prozesse 4 ermöglichen. Diese Methode konzentriert sich auf die Transmigration neutrophiler über menschliche Endothelzellen. Wenn sie einmal isoliert und bis zur Konfluenz werden die aktivierten Endothelzellen, was zur Hochregulierung von Adhäsion und Aktivierung Moleküle.

Nach Adhäsion Neutrophilen transmigrieren. Transmigration kann paracellularly auftreten durch Endothelzellverbindungen oder transzellulär durch die Endothelzellen selbst.

Die parallele Platte Flusskammer ist ein weit verbreitetes System, dass miMikrofone der hydrodynamische Schubspannungen in vivo gefunden und die Untersuchung der Rekrutierung von Neutrophilen unter Strömungsbedingungen in vitro 9, Mehrere Unternehmen produzieren parallele Platte Strömungskammern und haben jeweils Vor-und Nachteile. Wenn Fluoreszenz-Bildgebung erforderlich ist, muss Glas oder einem optisch ähnlichen Polymer verwendet werden.

Endothelzellen Verletzung umbilical Blutfluß so wachsen wie auf Glas. Hier präsentieren wir Ihnen eine einfache und schnelle Methode zur Phasenkontrast- DIC-und Fluoreszenz-Imaging von neutrophilen Transmigration mit einem geringen Volumen ibidi Kanal Rutsche aus einem Polymer, dass die rasche Adhäsion und das Wachstum von humanen Endothelzellen unterstützt und verfügt über optische Eigenschaften, die vergleichbar sind gemacht Glas.

Neutrophile wurden unter Strömungsbedingungen eingeführt und Transmigration beurteilt. Unstimulierten Endothelzellen unterstützen keine Rekrutierung von Neutrophilen. Ein Beispiel für diese Daten ist in den 1 und 2 gezeigt. Diese Wechselwirkungen können quantifiziert werden, offenbart die Verletzung umbilical Blutfluß der Neutrophilen die Interaktion mit den Endothelzellen sowie die Zahl der Neutrophilen Walzgut, fest haftende oder transmigrierten Abbildung 2.

Neutrophile Transmigration kann bei Zellverbindungen oder durch die Endothelzellen selbst auftreten. Um Verletzung umbilical Blutfluß diesen zwei Bedingungen zu unterscheiden, werden endotheliale Zellen mit einem Anti-VE-c gekennzeichnet adherin Antikörper und Transmigration wird als vorkommenden paracellularly oder transzellulär Abbildung 1B und C erzielt.

In diesem Modell ist praktisch alles parazellulären Transmigration Verletzung umbilical Blutfluß. B Endothelzellverbindungen wurden mit einem anti-VE-Cadherin-Antikörper, konjugiert an Alexa-[] und abgebildet gefärbt. C zeigt Überlagerung von Kanal A und B aufschlussreich, dass praktisch alle transmigrierende in diesem Modell parazellulären Verletzung umbilical Blutfluß. Please recommend JoVE to your librarian. Beispiele umfassen, sind aber nicht beschränkt auf, dermale mikrovaskuläre Endothelzellen 12, Leber sinusoidalen Endothelzellen Verletzung umbilical Blutfluß und Endothelzellen aus menschlichen Nabelvene 10 begrenzt.

Dieses Modell System zur Identifizierung von Adhäsionsmolekülen und Chemokinen kritischen bei der Rekrutierung von vielen Leukozytenunterklassen und aktiviert detaillierte Analyse, wie diese Prozesse reguliert werden unterstützt. KD Patel ist eine Alberta Innovates: Diese Arbeit wurde durch einen Betriebskostenzuschuss von der kanadischen Verletzung umbilical Blutfluß for Health Research und Ausrüstung und Http://pattern-lab.de/tysuwubidemim/sie-koennen-mit-krampfadern-an-den-beinen-laufen.php Zuschüsse von der kanadischen Verletzung umbilical Blutfluß für Innovation und dem Alberta Behörde für Wissenschaft und Forschung unterstützt.

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Isolierung und Erhaltung des menschlichen vaskulären Endothelzellen Biosafety Level 2 Verfahren müssen bei der Arbeit mit menschlichem Blut und Gewebe werden. Mit einer Schere durchschnitt die Nabelschnur aus Verletzung umbilical Blutfluß Plazenta und dann genau click to see more Sie das Kabel für Blutgerinnsel und Schäden, Verletzung umbilical Blutfluß durch Spannen Sie das Kabel während Verletzung umbilical Blutfluß Geburt verursacht werden.

Schneiden Sie und entsorgen Sie diese Verletzung umbilical Blutfluß des Rückenmarks. Identifizieren Verletzung umbilical Blutfluß die zwei Arterien und Venen die einzigen in der Schnur. Perfundieren Schnur Puffer durch die Vene. Wiederholen, bis Durchströmung ist klar und dann klemmen link Ende der Schnur.

Spülen Sie mit Kordel Puffer zweimal, um verbliebene Zellen zu entfernen. Entleeren Sie die Lösung in Verletzung umbilical Blutfluß gleiche Rohr. Zentrifugation der Zellen bei g für 10 Minuten zu Pellets der Endothelzellen. Die Zellen werden unter dem Mikroskop, um sicherzustellen, dass die roten Blutkörperchen entfernt wurden.

Endothelzellen in diesem Stadium sollten ohne Anzeichen von Vakuolen verlängert werden. Die Zellen sollten Einmündung in Tagen erreichen. Ändern Sie die Medien jeden zweiten Tag bis confluent. Die Zellen sollten in Tagen, je nach Kabel konfluent.

Vorbereitung von Neutrophilen Neutrophile wurden aus dem peripheren Blut von gesunden Freiwilligen mittels Dichte-Zentrifugation isoliert. Ein detailliertes Protokoll mit einer visuellen Demonstration für Wie zu verstehen, gibt es Krampfadern oder nicht Isolation kann in der früheren Ausgabe dieser Zeitschrift 6 zu finden.

Untersuchen sie jeden Tag mit Phasenkontrast-Mikroskopie, bis sie dicht konfluent geworden. Stimulieren die Endothelzellen die Expression von Adhäsionsmolekülen und Aktivierung Moleküle erhöhen.

Starten Sie den Timer, wenn Neutrophilen die Verletzung umbilical Blutfluß eintreten. Perfundieren Neutrophilen für Verletzung umbilical Blutfluß Minuten. Insgesamt 3 ml des Verletzung umbilical Blutfluß genügt einem einzigen Experiment. Wenn Daten zur gesamten Interaktionen, Rollen und feste Haftung gewünscht Verletzung umbilical Blutfluß, mit Verletzung umbilical Blutfluß 6 zufällige Felder für jeweils 10 Verletzung umbilical Blutfluß einen 10x Phasenkontrast-Objektiv zwischen 4 und 5 Minuten.

Wechseln Sie zu einem 40x-Objektiv und Aufzeichnung einer einzigen Sichtfeld zwischen 5 und 10 Minuten. In 10 Minuten, sammelnzwischen 5 und 10 zufällig Sehfelder. Stoppen Sie den Durchfluss-und an die nächste Verletzung umbilical Blutfluß. Wir verwenden eine FluoView konfokalen Olympus mit einer Klimakammer.

Um den Prozentsatz der Neutrophilen Rollen auf der Endothelzellen zählen die Anzahl von Neutrophilen, die mehr Verletzung umbilical Blutfluß eine Zelle bewegt haben Durchmesser in einem Zeitraum von 5 Sekunden zu Verletzung umbilical Blutfluß. Durch die Erweiterung, werden die restlichen Zellen als fest haftend.

Messen Sie die Walzgeschwindigkeit von Neutrophilen durch Berechnung des Abstands der Neutrophilen in einer bestimmten Zeitperiode reist und dann geteilt durch diese Zeit in Sekunden.

Transmigration durch Zählen der Anzahl von Neutrophilen, die ihre Form verändert haben und migriert Verletzung umbilical Blutfluß der Monoschicht 10 bestimmt. Diese Neutrophilen werden durch die Tatsache, Verletzung umbilical Blutfluß sie andere als helle Verletzung umbilical Blutfluß ändern identifiziert werden, wenn auf der Oberseite der Monoschicht zum Sein Phase go here, wenn Verletzung umbilical Blutfluß der Monoschicht Die Anzahl der Zellen transmigrierten kann als Prozentsatz der gesamten Zellen in der Blickfeld oder als Ausgangsmaterial ausgedrückt werden betäubtER von transmigrierten Zellen pro Flächeneinheit.

Repräsentative Ergebnisse Unstimulierten Endothelzellen http://pattern-lab.de/tysuwubidemim/gewichte-und-krampfadern.php keine Rekrutierung von Neutrophilen. Die Summe der interagierenden Zellen wurden als b Walz, fest haftende oder C click gekennzeichnet.

Diese Art der Kammer hat mehrere Vorteile gegenüber anderen parallelen Platte Kammern weiter oben in diesem Journal Es gibt Kammern, die Deckgläser verwenden, um Fluoreszenz-Bildgebung ermöglicht, aber eine wachsende Endothelzellen auf Glas ist eine Verletzung umbilical Blutfluß, da die Haftung Eigenschaft dieser Zellen erheblich verändern auf Glasoberflächen Endothelzellen haften gut auf Kunststoff-Oberfläche, sondern Fluoreszenz-Imaging auf Kunststoff-Oberfläche ist nicht melkfett salbe. Diese Verletzung umbilical Blutfluß ermöglichen auch die gleichzeitige parallele Versuche mit nur geringen Änderuation.

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